大鼠ELISA試劑盒本辦法要著重留意的是RF(1gM類)及其他非特異IgM的攪擾。RF(1gM類)因為其能與固相抗人u鏈抗體,并可與隨后參加的酶標抗體(動物IgG)反響,然后導致假陽性反響。而非特異IgM因為其在*步溫育中,可與特異IgM競爭與固相抗體,所以會影響測定的靈敏度。因而,運用本法測IgM,必須對臨床樣本進行恰當稀釋。樣本稀釋后,大鼠ELISA試劑盒上述產生攪擾效果的非特異IgM含量削減,而特異IgM因為處于相應病原體的急染期,滴度很高,必定稀釋后,不會有顯著影響,況且,在某些病原體如HBV的慢染期間,IgM類特異抗體也能繼續存在,只不過滴度要低許多。
因而,在運用直接法測定IgM抗體時,一般須將血清樣本用抗人IgG抗體或A預處理,以去掉IgG的攪擾。這么不但測定較為繁瑣,并且影響測定的特異性和靈敏度?,F在,常用的IgM抗體檢查辦法為捕獲法,即以抗人IgM抗體(抗人u鏈)作為固相抗體,大鼠ELISA試劑盒當參加血清標本時,其間的IgM類抗體(特異的和非特異的)即可被固相抗體捕獲,再參加特異抗原,其與固相上捕獲的IgM抗體后,參加酶標抗特異抗原的抗體,zui終參加底物顯色。
大鼠ELISA試劑盒具體操作步驟如下:
1.首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過夜包被聚苯乙烯等固相,構成固相抗體,洗刷去掉未與固相或不緊的抗體后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉,洗刷去掉未的部分及雜質。
2.參加含待測IgM抗體的臨床樣本如血清等,溫育必定時刻后洗板;此刻,待測樣本中的IgM抗體就會與固相上的抗P鏈抗體反響而吸附于固相上。
3.參加特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等,溫育必定時刻后洗板;此刻,特異抗原就會與固相上的特異IgM抗體發生反響。
4.參加酶符號的抗特異抗原的抗體,溫育必定時刻后洗板;此刻,在固相上即構成相應的抗原抗體復合物。